Мембранна технологія та роз’яснення вакцин (Ⅱ)

У попередній статті ми мали деякий попередній вступ до вакцин і стратегій пояснення вакцини, і ми продовжимо досліджувати їх у решті цієї статті. Дотримуючись вищесказаного, ми продовжуватимемо ділитися роз’ясненнями щодо вакцини та відповідних застосувань мембранних тканин.

 

2.2.2 Вплив фізико-хімічних властивостей вірусу

Після розгляду системи виробництва та методів видалення відповідних контамінантів на етапі очищення важливо взяти до уваги характеристики вірусу та зосередитися на максимізації виходу вірусу.

 

2.2.2.1 Легка адсорбція вірусу
Позитивно заряджені матеріали та допоміжні фільтри (такі як діатоміт) були розроблені для покращення ефекту глибокої фільтрації. Хоча позитивний заряд збільшує захоплення нуклеїнових кислот і HCP, відомо, що діатоміт зв’язує залишки клітин і колоїди. Однак ці матеріали також можуть утримувати вірус через механізм адсорбції. Оскільки вірус зазвичай негативно заряджений у розчині, може виникнути електростатична взаємодія з позитивно зарядженим фільтром.
Віруси також можуть зв’язуватися шляхом гідрофобної або неспецифічної взаємодії з певними фільтруючими матеріалами (такими як діатоміт або скловолокно). Віруси з оболонкою, завдяки своїй ліпідній оболонці, більш сприйнятливі до такої адсорбції. Якщо вірус адсорбується на фільтрі через електростатичну взаємодію, а частинки вірусу від’єднуються через конкуренцію солі, промивання фільтра буфером з високою провідністю може частково відновити вірус. Однак це також може вимивати забруднення, такі як HCP або нуклеїнові кислоти. Тому краще використовувати альтернативний фільтруючий матеріал, наприклад більш інертний поліпропілен.
Adenovirus is easily adsorbed, but different results have been confirmed. Using positively charged diatomite and deep filters. Borosilicate glass fiber filter material is also very well recovered. On the other hand, a patent proposed by Weggeman involving clarification of 20 – 40% adenovirus losses at PER, et al. Cell cultures were prepared with similarly positively charged deep filters containing diatomite. In this case, the nominal polypropylene filter showed a very high viral recovery rate (> 90%).
Добре відомо, що віруси грипу схильні до адсорбційної втрати під час освітлення. Тому використання безкоштовного фільтра на основі поліпропілену підходить для освітлення грипозної колекції. Thompson та інші повідомили про використання поліпропіленового фільтра з номінальним розміром 1,2 мкм, а потім мембрани PVDF 0.45 мкм для очищення клітинного вірусу грипу, що виробляється клітинами MDCK. Загалом було проведено дев’ять випробувань очищення в масштабі 20л із навантаженням 111 л/м2 для 1,2 мкм поліпропіленового фільтра та 105 л/м2 для 0,45 мкм PVDF фільтра. Результати показали, що більшість запущених вірусів добре відновилися (78-154%). Вони також повідомили про видалення до 58% hcDNA, але без значного видалення HCP.

 

2.2.2.2 Вирізання чутливих вірусів

Деякі віруси (інкапсульовані чи неінкапсульовані) виявляють низьку механічну стійкість і можуть бути зруйновані під час дії зсуву під час центрифугування та етапів мембранної фільтрації. Сили зсуву, що виникають під час етапів очищення, що включають фільтрацію або хроматографію, можуть спричинити відпадання вірусної оболонки, що впливає на інфекційність. Залежно від розміру, товщини та геометрії капсиду вірусний капсид може бути крихким або, навпаки, стійким до високих тисків. Деякі віруси з оболонкою, такі як віруси грипу, еластичні до механічних впливів і можуть витримувати великі деформації. З іншого боку, сила зсуву може спричинити відпадання оболонки менш стійких вірусів, таких як ретровіруси, що впливає на інфекційність вірусу.

Позаклітинні VLP оболонки також дуже вразливі. У відцентровому процесі генеруються високі швидкості зсуву, головним чином на вході та виході (високі швидкості зсуву генеруються на межі розділу газ-рідина). Коли вірус очищали градієнтним центрифугуванням, здатність деяких ретровірусів до трансдукції була значно послаблена. При проектуванні відцентрового розділення слід враховувати відносну нестійкість вірусних частинок до зсувних сил. Відцентрова сила не є єдиним джерелом удару зсуву, більш важливим є дизайн обладнання, особливо при імпорті та експорті також є значний удар зсуву. Відмінності в конструкції різних масштабів можуть призвести до відмінностей у виході та відновленні чутливих до зсуву вірусів у різних масштабах.

Віруси, чутливі до зсуву, повинні бути ретельно розроблені, оскільки величина напруги зсуву та час впливу напруги (через рециркуляцію) можуть бути високими. Для вірусів, чутливих до зсуву, краще використовувати пристрої з відкритим контуром (порожнисте волокно або відкриті пластини), щоб зменшити турбулентність і сили зсуву в каналі подачі.

Вибір робочих параметрів також повинен мінімізувати пошкодження вірусних частинок: низький перехресний потік, середній трансмембранний тиск (TMP) і короткий час обробки.

Забруднення мембрани під високим тиском призводить до втрати інфекційності вірусу, можливо, через сили, які зсув може діяти на вірусну оболонку. Розділення на основі мембрани базується на розмірі, а накопичення інгібіторів вірусу з великою молекулярною масою та вірусних частинок може зменшити інфекційність вірусних векторів.

Деградація чутливих до зсуву вірусів під час глибокої фільтрації широко не задокументована. Втрата вірусів під час глибокої фільтрації найчастіше пояснюється захопленням, адсорбцією або залежною від часу та температури вірусною деградацією продукту. Насправді, незважаючи на те, що в системах NFF може виникнути механічне навантаження, час впливу продуктів NFF на зсув є дуже коротким порівняно з іншими технологіями через швидкий одноразовий прохід у продуктах NFF.

 

2.2.2.3 Перехоплення відповідно до розміру апертури

Віруси понад 100 нм можна зберегти, видаливши мікоплазму або стерильні мембрани (0.22 мкм і менше). В цьому випадку особливу увагу слід приділити підбору фільтрів. Для етапів мікрофільтрації TFF краще використовувати мембрани 0.45 мкм або 0,65 мкм для хороших каналів продукту. Для багатоступеневої фільтрації NFF найщільніший шар більше або дорівнює 0,45 мкм. Вибираючи глибокий фільтр, слід бути обережним, оскільки деякі пристрої глибокого фільтрування можуть містити шар плівки, що може призвести до втрати продукту через накопичувач. Агрегація вірусів негативно впливає на виробництво вірусів і посилює утримання вірусів через розмір вірусу.

Відповідно до патенту Андре та Шамплюв’є, гомогенізація може запобігти або обмежити засмічення фільтра шляхом зменшення розміру заповнювача, забезпечуючи більший вихід. Гомогенізація також покращила фільтраційну здатність врожаю, яка зросла в 2.4-3 рази.

Занадто багато домішок може перешкодити відновленню вірусу. Домішки, як правило, забивають фільтр, а закупорені пори мембрани можуть призвести до зниження швидкості проходження вірусу. У патенті de Vocht і Veenstra згадується, що пряме освітлення високої щільності клітин Per. Збір за допомогою мембрани TFF ({{0}}.65 або 0.2 мкм) призвів до відновлення вірусу без аденовірусу. Відновлення може бути досягнуто шляхом селективного видалення ДНК клітини-хазяїна перед етапом 0,65 мкм TFF. 70% аденовірусів.

 

 

2.3 Приклад: Оптимізація роз’яснення вірусної вакцини

На Міжнародній конференції з біологічних процесів у 2011 році Санофі Пастер представила раціональний підхід до скринінгових фільтрів для розробки нових прояснених послідовностей для кандидатів на вірусні вакцини. Дослідження спрямоване на подолання проблем, які виникають під час оптимізації процесів культивування клітин і вірусів. Модифікації попереднього процесу призвели до втрати виходу на 20% і передчасного забруднення фільтра під час етапу освітлення, що призвело до відсутності збільшення масштабу. Для того, щоб створити надійний і масштабований етап очищення, була потрібна повна переробка послідовності фільтрів із показниками відновлення вірусу вище 85%.

Based on internal experience and scientific publications, the team selected 27 filters for an initial screening study. Small scale virus adsorption tests were performed on various filter media (polypropylene, nylon, cellulose ester, glass fiber, charged adsorption filter) and structures (pleated or deep filter). The virus yield was measured by ELISA and the clarifying efficiency of the preselected filtrate was compared by checking the reduction of turbidity. Preliminary screening studies showed that nylon and charged filters retained viral particles and virus recovery. Ten percent. The virus recovery rate of polypropylene and polyether sulfone filter was >. 80%. Швидкість відновлення ефіру целюлози та фільтрів зі скловолокна залежить від оцінки фільтра (20% або 90%).

На другому етапі компанія Sanofi Pasteur оцінила кілька комбінацій (послідовності фази 2 або фази 3) семи фільтрів, попередньо відібраних у скринінговому дослідженні. Тест на класифікацію постійного потоку проводився з малим фільтром. Крім того, у цьому експерименті використовувався більш високий вихід, ніж у скринінговому дослідженні. На основі результатів відновлення вірусу та здатності фільтра команда вибрала дві найкращі комбінації для подальшого вивчення.

- Послідовність 1 (Етап 2): 30 мкм складчастий поліпропіленовий попередній фільтр з номінальним номінальним значенням, а потім композитний ефір целюлози та багатошаровий фільтр зі скловолокна (пористість 1/0,5 мкм)

- Послідовність 2 (стадія 3): той самий попередній фільтр (поліпропіленовий фільтр з номінальним номінальним номінальним значенням 30 мкм), за яким слідує проміжний багатошаровий поліпропіленовий фільтр і, нарешті, асиметрична поліефірсульфонова плівка.

 

The robustness of these two clarified sequences has been challenged by repeated constant flow sizing experiments with different harvest batches. While both potential sequences demonstrated enhanced capabilities compared to the reference sequence, only sequence 1 achieved virus recovery objectives (>85%), як показано на малюнку 1.

Малюнок 1. Середнє відновлення вірусу на кожному етапі фільтрації. Дослідження стабільності оцінювали для трьох послідовностей фільтрації, з яких лише послідовність 1 із використанням складеного поліпропілену з номінальним номінальним номінальним розміром 30 мкм і фільтра з ефіру целюлози та скловолокна 1.0/0,5 мкм досягла глобальної цілі відновлення .

Центрифугування також оцінювалося як первинний етап освітлення з подальшою остаточною фільтрацією {{0}}.45 мкм. Було перевірено кілька пар швидкість/тривалість. Хоча швидкість фільтрації 0,45 мкм була збільшена вдвічі, кінцевий вихід був нижчим за цільовий 85%. У результаті центрифугування більше не вивчалося.

Нарешті, продуктивність послідовностей фільтрації з поліпропілену та скловолокна була оцінена у більшому масштабі (розмір біореактора 160 л). Послідовність фільтрації показана на малюнку 2.

Малюнок 2 пояснює комбінацію фільтрів і графічне представлення поступового виходу рядка. Поїзд A — традиційний процес, а потяг B — оптимізований процес. Оптимізована послідовність B може зменшити площу попередньої фільтрації в 3 рази, скасувати етап проміжної фільтрації та зменшити кінцеву площу фільтрації в 10 разів, таким чином збільшуючи глобальне відновлення вірусу на 3%.

Кілька партій було успішно очищено без ознак засмічення фільтра, час обробки відповідав виробничим обмеженням і вихід вірусу > вісімдесяти п’яти відсотків. Оптимізація етапу очищення не вплинула на наступні кроки та ключові якості вакцини. Таким чином, вибрану послідовність очищення використовували в процесі виробництва вакцини (біореактор розміром 1000 л), і продуктивність була успішно підтверджена.

 

03 Уточнення бактеріальних вакцин

3.1 Міркування щодо уточнення бактеріальних вакцин

Відповідно до Medical Thesaurus (2015), бактеріальна вакцина визначається як суспензія розведених або вбитих бактерій або їх антигенних похідних, яка використовується для індукції імунної відповіді для запобігання або лікування бактеріальних захворювань. Загалом, бактеріальні вакцини можна розділити на чотири підкатегорії залежно від типу активного антигену. Цей агент може бути:

- Вбиває або послаблює всі живі бактерії. Також відома як вакцина БЦЖ.

- Очищення антигенних детермінант (субодиничні вакцини). Вакцина проти сибірської виразки або безклітинна вакцина проти кашлюку.

- Бактеріальні токсини (анатоксини). Дифтерійний і правцевий анатоксини.

- Плазміда (пДНК).

Через широку різнорідність продуктів сімейства проблеми, пов’язані з технологічним процесом на початку та у подальшому, значною мірою залежать від типу вакцини, що виробляється. Отже, після початкової стадії бродіння можна очищати або не очищати, щоб можна було здійснити стадію освітлення.

 

3.2 Роз’яснення стратегії щодо бактеріальної вакцини

3.2.1 Анатоксин

Два найпоширеніші анатоксини, що виробляються для використання у вакцинах, — дифтерійний і правцевий, які виробляються відповідно Corynebacterium diphtheriae і Clostridium tetani. Виробництво обох вакцин підлягає суворим нормативним вимогам. Технічний звіт ВООЗ та додатки до нього містять чіткі рекомендації щодо забезпечення якості, безпеки та ефективності вакцин проти правця та дифтерії. Загальна належна виробнича практика застосовується до виробництва обох вакцин, і працівники повинні пройти відповідне навчання та отримати додаткову імунізацію проти обох захворювань.

GMP суворо вимагає, щоб чистота та якість кінцевого продукту були продемонстровані. Відповідно до ВООЗ та ЄП, ефективність остаточної вакцини проти правця повинна визначатися порівнянням in vivo або будь-яким іншим перевіреним методом з відповідною еталонною речовиною, відкаліброваною в міжнародних одиницях відповідно до Міжнародного стандарту для правцевого анатоксину. Оновлені вимоги до ефективності були опубліковані в 2011 році і можуть відрізнятися в залежності від методу оцінки. Необхідно також продемонструвати безпеку (без токсинів і відновлювальної токсичності) кожної серії вакцини. Нарешті, необхідно звернути увагу на стабільність вакцин, особливо в режимі реального часу.

 

3.2.2 Вакцина на основі плазмідної ДНК

Вакцини плазмідної ДНК використовуються для цілей охорони здоров’я тварин, а кілька вакцин плазмідної ДНК для використання людьми знаходяться на різних стадіях розробки та клінічної оцінки. Після ферментації E. coli бактерії збирають і розщеплюють для вивільнення плазмідної ДНК.

Видалення залишків клітин зазвичай здійснюється шляхом центрифугування або фільтрації. Ця тема широко висвітлювалася в останніх публікаціях. У цій публікації описано поточні процеси та проблеми, пов’язані з процесами та проблемами, пов’язаними з процесами та проблемами, пов’язаними з процесами та проблемами, пов’язаними з процесами та проблемами, пов’язаними з процесами та проблемами, пов’язаними з формуванням пДНК.

Автори також надають уявлення про прогалини на кожному етапі типового процесу виробництва пДНК і потенційні майбутні інновації та/або поточні прогалини в технології, які можуть призвести до подальшої оптимізації процесу.

Вакцини плазмідної ДНК готують у два етапи. По-перше, бактеріальні клітини видаляють із культурального середовища, а по-друге, видаляють залишки клітин після лізису клітин. Залежно від масштабу, клітини збирають за допомогою центрифугування або мікрофільтрації TFF. Дискова центрифуга викидається з перервами на високій швидкості, і вихід суперскручених плазмід є низьким через пошкодження зсувом під час розряду. Якщо необхідно використовувати центрифугування, найкраще підійде центрифуга з твердою чашею. Пристрої з відкритим каналом, плоскі TFF з мікрофільтраційними мембранами 0.1 або 0.2 мкм або пристрої з порожнистим волокном можуть добре працювати.

Оскільки пристрої з порожнистим волокном мають високу міцну навантажувальну здатність, їм іноді віддається пріоритет. Зазвичай ці процеси відбуваються при концентрації в 3-5 разів, а потім у 3-5 об’ємах трансфільтрації. Щоб зменшити зсув і краще контролювати поляризацію мембрани, настійно рекомендуються операції контролю проникнення. Хоча центрифуги є більш економічно ефективними у великомасштабних комерційних операціях, менш масштабні процеси, як правило, використовують фільтрацію через портативність і легкість експлуатації.

Флокулянти використовувалися для полегшення обробки, але це може призвести до втрати продукту. Деякі також рекомендують використовувати частинки інертної діатомової землі з подальшою фільтрацією в мішок.

Cell lysis produces viscous products, including large particles, cell fragments, soluble impurities, fine colloidal particles, and pDNA. Due to the complexity of the material, removing such fine solids is a difficult separation. Gradient density deep filter or open hole structure (>0.45m) мембранні фільтри добре видаляють залишки клітин. У зв’язку з сильним засміченням уламками клітин перевага надається фільтрації з низьким потоком або низьким тиском. Мікрофільтри на основі Tff були використані для цього етапу та промислових рукавних фільтрів. Статичний (у змішувальній ємності) і безперервний (з використанням поточного статичного змішувача) крекінг вимагає різних фільтрів.

 

3.3 Приклад: Порівняння ефективності центрифугування, методів NFF і TFF для очищення правцевих токсинів

Muniandi та ін. порівняли три різні методи очищення правцевих токсинів і анатоксинів із ферментаційних рідин, а саме центрифугування, глибоке фільтрування (NFF) і TFF. Випробуваний матеріал був виготовлений у ферментері об’ємом 400л з використанням модифікованого середовища Міллера (МММ). Під час дослідження центрифугування клітини відокремлювали від серця при 4000 об/хв у контейнері 6 × 1 л протягом 60 хвилин. Було взято зразки супернатанту для виявлення виділення анатоксину. Глибока фільтрація використовує фільтри з глибиною 0,45 мкм і 0,22 мкм, що містять діатомову землю та целюлозу для освітлення ферментаційного бульйону. Процес проводиться при температурі 35 градусів і 12psi.

Модуль TFF із відкритою плоскою панеллю термічно з’єднується з мембраною PVDF 0.22 мкм за методом TFF. Процес освітлення на основі TFF виконувався при швидкості перехресного потоку 2000 л/год при 23 градусах, а освітлений фільтрат концентрувався при швидкості перехресного потоку 1000 л/год при 25 градусах за допомогою звичайної сендвіч-мембрани TFF 30kD PES. Освітлену м’ясну рідину (приблизно 6 л) концентрують у 10 разів у цьому процесі ультрафільтрації. Тести на правцевий анатоксин проводили на концентрованих зразках фіксатора для оцінки відновлення продукту.

Глибока фільтрація призвела до рівня вилучення продукту приблизно на 89%, а установки TFF призвели до рівня вилучення продукту понад 97%. Процеси мікрофільтрації та ультрафільтрації стабільно дають більший вихід продукту, ніж процес NFF. Ці результати базуються на тестах флокуляції (Lf).

 

04Освітлення полісахаридних вакцин

4.1 Розгляд уточнення полісахаридної вакцини

Процес виробництва як незв’язаних/вільних полісахаридних вакцин, так і пов’язаних полісахаридних вакцин починається з культивування бактерій-господарів у ферментері. Наприкінці бродіння бактерії можна обробити миючими засобами, такими як DOC (дезоксихолат натрію), Triton®X-100 або іншими відповідними реагентами, щоб знищити бактерії та сприяти вивільненню полісахаридів. Через велику ємність батареї збір безпосередньо через NFF є економічно недоцільним, оскільки пропускна здатність може бути дуже низькою. Тому ідеальним вибором є використання центрифуги для розділення згустків клітин. Також можна використовувати діапазон мікрофільтрації TFF. Безклітинний центр/пенетрант, що містить потрібний полісахарид, додатково очищається за допомогою системи глибокої фільтрації NFF, після чого виконується фільтрація з біологічним мішком, а потім переходить до подальшої обробки для подальшого очищення.

 

4.2 Стратегія роз’яснення полісахаридної вакцини

4.2.1 Процедура першого уточнення

Центрифугування є одним із найпоширеніших методів відділення клітин від ферментаційних рідин. Залежно від масштабу можна вибрати безперервне центрифугування або періодичне центрифугування. Важливо відзначити, що належна оптимізація умов центрифугування та їх роботи є важливими для успішного очищення на нижній частині потоку. Вибираючи конкретну мембрану TFF і розмір пор, важливо пам’ятати про молекулярну масу полісахаридів, які часто є великими та структурно складними, з молекулярною масою приблизно від 500кДа більше ніж 1000 кДа. Завдяки великому розміру відкритих пор використання мембран MF 0,22 мкм, 0,45 мкм, 0,65 мкм може забезпечити успішне відновлення молекул PS в осмотичному розчині.

 

4.2.2 Процедура вторинного роз’яснення

Прозорість/каламутність безклітинного ферментаційного розчину, який досягає етапу вторинного освітлення, залежить від конкретних бактерій, типу розщеплення, індивідуального типу сироватки та техніки, яка використовується для етапу первинного освітлення. Каламутність центру може коливатися приблизно від 50 до 150 NTU. Позитивно заряджений глибокий фільтр фракційної щільності, виготовлений із просоченого діатоміту з наповненими целюлозними волокнами, можна використовувати для очищення та зниження його каламутності до < 5NTU.

Пропускна здатність цього глибокого фільтра може коливатися приблизно від 150 л/м3 до 250 л/м3. Як правило, розчин освітленого продукту фільтрують через наступну 0,45 мкм біопідтримувану відновлювальну мембрану або 0,22 мкм стерилізовану мембрану для видалення будь-яких залишкових частинок клітин, колоїдів і потенційних мікроорганізмів.

 

4.3 Приклад: освітлення центру ферментаційного бульйону Streptococcus pneumoniae після центрифугування

Клітини відокремлювали шляхом додавання {{0}}.1% (об./об.) ферментаційного бульйону Streptococcus pneumoniae типу 8 (20 л) безперервним центрифугуванням. Центр збору фільтрується через два окремі глибокі фільтри з позитивним зарядом і діатомітовою землею, що містять целюлозні волокна. Фільтрат окремого глибокого фільтра потім фільтрували через мембрану PVDF 0,45 мкм із біологічним навантаженням. Усі випробування фільтрації проводили в режимі постійного потоку з перистальтичними насосами. Тести фільтрації з використанням зарядженого глибокого фільтра та ферментаційного бульйону Streptococcus pneumoniae серотипу 8 призвели до зниження каламутності з приблизно 120 NTU до 3 NTU. Випробування проводилися при швидкості потоку 140 150 л/м2/год і різниці тиску в кінцевій точці 20-25 psi, з об’ємною пропускною здатністю приблизно 180-200 л/м2.

Подібні тести фільтрації проводили на ферментаційному бульйоні Streptococcus pneumoniae серотипу 19A. Центрифугована рідина 19A очищується через заряджений глибокий фільтр, який зменшує каламутність приблизно з 40 NTU до 3 NTU. Випробування проводилися при постійній швидкості потоку приблизно 140-160 л/м2/год, а об’ємна пропускна здатність 200-230л/м2 була досягнута при кінцевому тиску приблизно 15 psid. Аналіз HLPC зразків продуктів, зібраних під час випробувань оцінки фільтрації, не показав значних втрат продуктивності для глибокої фільтрації або 0.45 мкм (або 0,22 мкм) мембран.

 

05 Висновок

Розробка процесів освітлення вимагає інтеграції кількох одиничних процесів, таких як центрифугування, TFF-MF, глибоке фільтрування та асептичне фільтрування. Оптимізація процесу очищення вимагає розуміння того, як різні операції блоку впливають одна на одну. Завдання полягає в тому, щоб вибрати технології та інструменти (обладнання та пристосування), щоб задовольнити дедалі складніші вимоги до технологічних рідин, які виробляють сучасні більш ефективні біореактори. Збільшення вихідної продуктивності (титру вірусу, щільності клітин тощо), клітинного сміття та продуктів клітинного лізису ускладнює процес освітлення та заплутує вибір обладнання для розділення та фільтрації.

При виборі масштабу процесу слід враховувати конструкцію обладнання, простоту використання та чистоту. Це забезпечить ефективне перетворення та безпеку оператора при роботі з викинутими фільтрами. Для того, щоб розвинути процес освітлення, важлива інтеграція етапів очищення, щоб гарантувати, що обробка врожаю, зібраного вище за течією, є економічно ефективною. Цілий ряд блоків фільтрації легко доступний для полегшення лабораторних випробувань, дослідного виробництва та повнорозмірної обробки. Впровадивши добре розроблений робочий план масштабування, який оцінює кілька варіантів очищення, можна з упевненістю вибирати та розмір фільтрів очищення, щоб захистити операції наступного блоку, одночасно зменшуючи експлуатаційні витрати.

Роз’яснення щодо вакцини пов’язане з кількома проблемами. Як правило, процес фільтрації потрібно адаптувати до системи виробництва, агента інактивації або лізису та представлення антигену, не обов’язково вакцин. Традиційні процеси виготовлення вакцин зазвичай використовують центрифугування для початкового освітлення вакцини. Сучасні вакцини з кількома технологічними платформами та меншими обсягами обробки роблять вакцини більш придатними для очищення за допомогою мембранних технологій. Нещодавно розроблені вакцини з використанням сучасних клітинних ліній і систем експресії та використання більш визначених умов культивування клітин роблять багато процесів вакцинації більш сприятливими для фільтрації.

 

Однак неоднорідність антигенного компонента або «антигену-мішені» продуктів вакцини збільшує складність фільтраційного очищення. Антигени розрізняються за розміром, хімічним складом поверхні та зарядом. Ці характеристики впливають на вихід і відновлення антигенів. Вакцини представляють унікальні проблеми для роз’яснення, головним чином через розмір їхніх макромолекул. Це, у поєднанні з проблемами можливостей щодо роз’яснень, збільшує потребу в інструкціях щодо стратегій розробки процесів.

Розмір і масштаб промислового виробництва вакцини має значний вплив на вибір технології освітлення. Будучи розташованим вище за процесом, належна оптимізація очищення є критичною для успіху операцій наступного блоку, максимізації врожайності, відновлення та надійності процесу. У той час як центрифугування залишається життєздатним технічним варіантом для первинного освітлення, блоки мікрофільтрації з відкритим каналом (TFF) для первинного освітлення та тонкі глибокі фільтри або мембранні фільтри для вторинного освітлення набувають визнання в промисловості вакцин. Ця зміна зумовлена ​​потребою у швидшій обробці, швидкому розвитку процесів, портативних процесах і одноразових реалізаціях. NFF пропонує економічний процес, придатний для одноразових варіантів малого та великого масштабу. У зв’язку зі зміною нормативних потреб наявність попередньо асептичних пристроїв або модулів гамма-опромінення, призначених для автоклавування, сприяє швидшій адаптації технологій на основі NFF або TFF.

Багато класичних процесів виробництва вакцин передбачають еволюцію операцій очисних установок, головним чином через нормативні обмеження та пов’язані з цим високі витрати на повторну валідацію та повторну перевірку або клінічні випробування. Платформний процес із використанням схеми очищення на основі фільтрації широко використовувався в кількох біологічних агентах із високим ступенем успіху. Приклади та випадки, наведені в цьому документі, показують, що виробники вакцин мають потенціал для досягнення такого рівня стабільності, економічної життєздатності та одноразової корисності, дотримуючись шаблонного підходу.

Іншими перевагами фільтрації перед центрифугуванням є чутливі до зсуву віруси або віруси, які мають тенденцію накопичуватися на межі розділу повітря. Оскільки виробники пристроїв виводять на ринок нові продукти, виробники вакцин будуть і надалі краще оснащені для процесу роз’яснення.

 

Як перша компанія в ланцюзі локалізації, Guidling Technology накопичила достатній відповідний досвід у роз’ясненні вакцин. Guidling Technology – це компанія з розробки та виробництва, яка зосереджується на біофармацевтиці та клітинних культурах, очищенні та розділенні. Продукти широко використовуються в біомедицині, діагностиці, промисловій фільтрації рідини, виявленні, освітленні, очищенні та концентрації; Компанія Guidling успішно розробила ультрафільтраційну центрифужну трубку, ультрафільтраційну/мікрофільтраційну мембранну касету, фільтр для видалення вірусів, пристрій тангенціального потоку фільтра, глибокий мембранний стек тощо, які повністю відповідають сценаріям застосування біофармацевтичних засобів і культур клітин.

Наші мембрани та мембранні фільтри широко використовуються в концентрації, екстракції та розділенні попередньої фільтрації, мікрофільтрації, ультрафільтрації та нанофільтрації. Наш широкий асортимент лінійок продуктів, від невеликих одноразових лабораторних фільтрів до систем фільтрації виробничого типу, випробувань на стерильність, ферментації, культури клітин тощо, може задовольнити потреби тестування та виробництва.