Метод технічного обслуговування та використання ультрафільтраційної трубки
Метод технічного обслуговування та використання ультрафільтраційної трубки
Функції ультрафільтраційної трубки:
1) Концентрація; 2) Знесолення; 3) Замінити буфер; 4) Має ефект часткового очищення.
1. Нову ультрафільтраційну трубку можна використовувати безпосередньо без іншої обробки;
2. Ультрафільтраційну трубку не можна стерилізувати при високій температурі;
3. Обробка ультрафільтраційної трубки при зміні концентрованого білка
Ультрафільтраційну трубку можна використовувати повторно. Замочіть його в 0.1M NaOH на 1-2 години, промийте водою, а потім промийте відповідним розчином (стерилізована вода або PBS) на центрифузі 3 рази, який можна використовувати для концентрації нового білка;
4. Обробка нормально розміщеної ультрафільтраційної трубки
Для ультрафільтраційної трубки, яка часто використовується, замочіть її в 0.1M NaOH на 1-2 години, промийте водою та замочіть у стерилізованій воді. Обов’язково тримайте мембрану фільтра вологою і запобігайте розмноженню бактерій;
5. Обробка ультрафільтраційної трубки, розміщеної на тривалий час
Якщо ультрафільтраційна трубка не використовується протягом тривалого часу, замочіть її в 0.1M NaOH на 1-2 години, промийте водою та замочіть у 20-відсотковому етанолі для зберігання. Обов’язково тримайте мембрану фільтра вологою і запобігайте розмноженню бактерій;
6. Відцентрова швидкість, що використовується для ультрафільтраційної трубки
Відцентрова швидкість зазвичай становить 4000 об/хв (загалом рекомендується 3000 г, а максимальна не може перевищувати 4000 г). Після центрифугування протягом 5-8 хвилин 4 мл зразка можна сконцентрувати до менш ніж 1 мл до десятків мікролітрів; Якщо швидкість занадто висока, цільовий білок відпаде, що призведе до втрати цільового білка; Низька швидкість, трудомісткість і низька ефективність роботи;
7. Запобіжні заходи, коли головка пістолета простягається в ультрафільтраційну трубку
При додаванні білкового розчину або буфера в ультрафільтраційну пробірку можна використовувати синю головку пістолета; Однак, коли концентрований цільовий білок поглинається з дна ультрафільтраційної трубки, слід використовувати жовту головку пістолета; Коли головка пістолета вставлена в ультрафільтраційну трубку, вона повинна не торкатися мембрани фільтра, щоб уникнути проколу мембрани фільтра;
8. Зменшити втрати адсорбції білка в ультрафільтраційній трубці
Мембрана ультрафільтраційної трубки може адсорбувати білок, що зменшить цільовий білок приблизно на 30 відсотків; Щоб зменшити втрати білка, після поглинання розчину цільового білка продуйте дно ультрафільтраційної пробірки білковим буфером, щоб промити більшу частину білка, адсорбованого мембраною фільтра, і зменшити втрату цільового білка; Якщо очищений білок концентрований, зверніть увагу, що концентрований об’єм не повинен бути занадто малим; Як правило, незалежно від способу центрифугування, приблизно 200 мкл розчину білка буде утримуватися на дні;
9. Як визначити вихід з ладу ультрафільтраційної трубки
При нормальному використанні, коли мембрана фільтра не пробита, концентрований білковий розчин не містить білка або його кількість дуже мала (включаючи цільовий білок), тоді як перший відфільтрований розчин містить цільовий білок, це вказує на те, що мембрана фільтра недійсна і необхідно замінити на нову ультрафільтраційну трубку.
